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电泳操作步骤的讲解以及它的优势说明

2019-04-15 14:47:09
喷涂机的特点及影响设备报价因素

随着时代的进展,很多企业都开始露出尖尖角,作为化工行业的电泳是很多企业必不可少的设施之一,那么有关电泳的操作步骤到底是怎样的呢?以及它有着怎样的优点呢?下面就和小编一起了解一下吧。以下关于“电泳操作步骤的讲解以及它的优势说明”的介绍。



【聚丙烯酰胺凝胶电泳有哪些方面的优点】


聚丙烯酰胺凝胶有以下优点:


1、聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物,没有或很少带有离子的侧基,因而电渗作用比较小,不易和样品相互作用。



2、由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,在聚合前可调节单体的浓度比,形成不同程度交链结构,其空隙度可在一个较广的范围内变化,可以根据要分离物质分子的大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性质。


一般说来,含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶,机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物质,1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶,而分子量特别大的可采用含丙烯酰胺4%的凝胶,大孔胶易碎,小孔胶则难从管中取出,因此当丙烯酰胺的浓度增加时可以减少双含丙烯酰胺,以改进凝胶的机械性能。


3、在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明,易观察,可用检测仪直接测定。


4、丙烯酰胺是比较纯的化合物,可以精制,减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体,甲撑双丙烯酰胺称交联剂,在水溶液中,单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝胶。


【电泳具体操作流程有哪些】


1、将玻片装置搭建起来,加水静置,检查是否有渗漏。


2、配制分离胶加入2玻片间,加时尽量减少气泡,由玻片一端连续、快速、均匀的注入,可适当摇晃,使得分离胶上界面尽量水平;加保护液


(0.1%SDS)静置凝聚。加保护液时,喷涂应均匀扫过玻片上沿,切不可由一端注入。


3、配制浓缩胶待分离胶凝固后,去除保护液,依同样方法加入上层浓缩胶,并插入梳齿模具,静置。插入模具后,加少许浓缩胶,补平液面



4、配制电泳缓冲液,浓缩胶凝固后,玻片取下,放入电泳槽中,有凹陷玻片朝向内侧,并将玻片用夹子夹紧,在外侧玻片粘上凹槽指示薄片,取下梳齿,加入电泳缓冲液,平板内侧液面以刚没过凹槽上沿为宜。


5、样品处理将待分析样品配制成合适的浓度或浓度梯度溶液,连同marker分装于Ep管中,并加入loadingbuffer,100℃煮沸。


6、将样品液依次加入梳齿形胶孔中,每孔上样量10ul。


7、接通电源,设为恒流10mA,待样品跑至分离胶界面后,调整电流为15mA。


8、胶跑完后,固定(0.5h~)、染色(1.5h~)、脱色。


固定液:40%乙醇+10%乙酸+纯水(室温)


脱色液:25%乙醇+8%乙酸+纯水(室温)


考染液:0.02%考马斯亮蓝原液(原液配制—100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇,加入100ml85%(w/v)磷酸)将原液用乙醇:乙酸:


水=3:1:6的溶液稀释10倍,即可用于胶片染色。


注意:


1、玻璃板一定要清洗干净,否则在染色时会有不必要的凝胶背景。


2、过硫酸铵(Ap)要新鲜配制。40%的过硫酸铵储存于冰箱中只能使用2-3天,低浓度的过硫酸铵溶液只能当天使用。


3、分装的TEMED须用锡箔纸包裹避光保存于4℃冰箱内。


4、SDS溶液切不可放入冰箱,会产生沉淀。


以上关于“聚丙烯酰胺凝胶电泳有哪些方面的优点”和“电泳具体操作流程有哪些”的介绍,希望能让您了解“电泳操作步骤的讲解以及它的优势说明”带来帮助。

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