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电泳的使用方法介绍以及电泳喷嘴发生问题的原因

2019-04-16 09:48:05
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随着科技的发展,越来越多的人开始认识电泳,它不仅厚度均匀,而且耐腐蚀性好,常用于驾驶室的板材涂装,那么我们在使用电泳的时候需要知道哪些要点呢?下面就和小编一起详细的了解一下吧。以下关于“电泳的使用方法介绍以及电泳喷嘴发生问题的原因”的介绍。



【操作电泳的具体方法有哪些】


聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。



操作法


(1)制胶取溶液A2ml,溶液B5.4ml,加脲2.9g使溶解,再加水4ml,混匀,抽气赶去溶液中气泡,加0.56%过硫酸铵溶液2ml,混匀制成胶液,立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10cm×0.5cm)中,使胶层高度达6~7cm,然后徐徐滴加水少量,使覆盖胶面,管底气泡必须赶走,静置约30分钟,待出现明显界面时即聚合完毕,吸去水层。


(2)标准品溶液及供试品溶液的制备照各药品项下的规定。


(3)电泳将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内,每管加供试品或标准品溶液50~100μl,为防止扩散可加甘油或40%蔗糖溶液1~2滴及0.04%溴酚蓝指示液1滴,也可直接在上槽缓冲液中加0.04%溴酚蓝指示液数滴,玻璃管的上部用电极缓冲液充满,上端接负极、下端接正极。调节起始电流使每管为1mA,数分钟后,加大电流使每管为2~3mA,当溴酚蓝指示液移至距玻璃管底部1cm处,关闭电源。


(4)染色和脱色电泳完毕,用装有长针头并吸满水的注射器,自胶管底部沿胶管壁将水压入,胶条即从管内滑出,将胶条浸入稀染色液过夜或用染色液浸泡10~30分钟,以水漂洗干净,再用脱色液脱色至无蛋白区带凝胶的底色透明为止。


(5)结果判断将胶条置灯下观察,根据供试品与标准品的色带位置和色泽深浅程度进行判断。将清晰的胶条置双波长薄层扫描仪或凝胶电泳扫描仪中扫描并积分,由各组分的峰面积计算含量(1%)。


【引起电泳喷嘴失效的原因有哪些】


1、侵蚀。当高流速的液体经过喷嘴孔处表面时,就会对喷嘴孔出现腐蚀现象,造成喷射压力减小降低、喷射状态变得无顺序。喷嘴发生侵蚀的可能性取决于液体的喷淋压力、硬度、所使用的化学材料种类及其用量。另外,液体中的颗粒杂质也会使喷嘴受到严重侵蚀。



2、腐蚀。化学药剂也会引起喷嘴材料的腐蚀。


3、阻塞。杂质在喷嘴内部或外部边缘的堆积会造成喷嘴的阻塞。这将影响喷嘴的喷射形状、喷淋压力,致喷射效果大幅度变差。


4、温度。喷嘴长时间在高温或异常温度下工作,会导致喷嘴因材料软化而损坏。


5、意外损害。不正确的使用和不能及时进行保养是导致喷嘴意外损害的主要原因。


喷淋系统喷嘴尽管通常设计成凹式,但扇形喷嘴的偏移结构却很容易受到损害。电泳槽工件的掉槽、挂具刮碰等均会导致喷嘴损伤或脱落。


喷嘴问题的识别与日常维护:


1、对于喷淋系统,要经常检查,对有堵塞的喷嘴、方向不对的喷嘴,进行及时的处理,以确保正常的喷射状态。


2、对于电泳槽,掉件打捞时,要注意打捞方式、手法,尽可能地避免钩掉或损坏搅拌喷嘴;挂件时要注意工件大小与挂法,避免刮到喷嘴。


以上关于“操作电泳的具体方法有哪些”和“引起电泳喷嘴失效的原因有哪些”的介绍,希望能让您了解“电泳的使用方法介绍以及电泳喷嘴发生问题的原因”带来帮助。

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